Percoll 是一种适用性广且操作灵活简单的低密度梯度分离液,可用来分离细胞,亚细胞颗粒,细菌,病毒,甚至实现受损细胞及其碎片与完整活细胞的分离。Percoll 主要由表面包被单层乙烯吡咯烷酮(PVP)的硅胶颗粒组成,直径 15-30 nm,游离 PVP 的含量仅占 1-2%。由于颗粒大小的异质化,离心过程以不同的速率沉淀,自发产生一个匀质化且等渗的梯度,密度在 1.0-1.3 g/ml 之间。大部分沉淀系数>60S 的生物颗粒都可以用 Percoll 实现分离。
特定的待扩增基因片段起始含量越大,则指数扩增过程越短,当扩增速率趋于稳定后,则无论原来样品中起始模板含量多少,扩增片段的含量通常是一样的。理想的扩增结果:Y=X×2其中Y代表扩增产物量,X代表PCR反应体中的原始模板数n为扩增次数;理论上PCR扩增效率为100%,PCR产物随着循环的进行成指数增长,但实际上:DNA的每一次复制都不*,即每一次扩增中,模板不是呈2的倍增长;实际应为:Y=X(1+E),其中E代表扩增效率:E=参与复制的模板/总模板,通常E≤1,E在整个PCR扩增过程中不是固定不变的。通常X在1~105拷贝、循环次数n≤30时,E相对稳定,原始模板以相对固定的指数形式增加,适合定量分析,这也就是所谓的指数期;随着循环次数n的增加(>30次),E值逐渐减少,Y呈非固定的指数形式增加,进入平台期。
percoll细胞分离液
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