细胞克隆筛选系统说明书-www.qydsj.cn

细胞克隆筛选系统的加药时间和维持浓度的确定方法：
1，由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质。所以筛选不能太早；但是也不能太晚，因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大，增值较慢，时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，导致筛选不出阳性克隆，一般要在转染24小时之后才开始加G418筛选。随着细胞的代谢G418的浓度和活性都回下降，所以每3~5天都要更换一次含有G418的筛选液。这时药物浓度可以降至200ug/ml。
2，加抗生素的时机，主要是考虑插入到细胞基因组的抗性基因是否已经得到表达。一般是转染48小时后加入抗生素。挑出单克隆后就可以用维持浓度，一般是筛选浓度的1/2。关于维持浓度，有人说细胞会出现对抗生素的抗性，应不断提高其浓度。而且，如果你要挑选到几个阳性克隆中较高表达的克隆的话，可以调整抗生素的浓度。当然，抗性基因高表达，目的基因不一定就跟着高表达。
细胞克隆筛选系统的有限稀释法是目前常用的一种常规方法，这种方法筛选细胞的好处就是基本上不会伤害细胞。整个过程中细胞所经历的，也仅仅是在移液枪头中的短暂停留，因此几乎是零损伤。不过，这种方法的弊端也是显而易见，就是效率问题。
细胞克隆筛选系统
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